微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)兩種方法
2016-09-09 09:25:16
天緯化學(xué)
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1.一次加菌的28 天微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)
此方法參照美國(guó)藥典( 第2 1 版) 上微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)檢測(cè)防腐劑效果的方法。稱取各受試樣品30g, 加入混合細(xì)菌或混合霉菌懸液, 每克受檢膏霜最終含菌量分別為5×106個(gè)細(xì)菌和3 ×105個(gè)霉菌。然后充分混勻, 置于28℃下。在接菌的0、7、14、2 1 和28天取樣分析: 準(zhǔn)確稱取3g樣品, 加到含有玻璃小珠的滅菌錐形瓶?jī)?nèi), 加入27ml滅菌生理鹽水, 充分震蕩混勻, 此懸液為1∶10稀釋液；然后再用滅菌生理鹽水按10倍依次稀釋。按平板傾注法計(jì)數(shù)受試品中含菌量, 細(xì)菌培養(yǎng)是37 ℃下24h～48h，霉菌培養(yǎng)為28℃下3～5 天。此實(shí)驗(yàn)用以評(píng)判防腐劑的有效與否。評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)為: 當(dāng)每克樣品中一次接菌( 1×106細(xì)菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量減少至不高于起始濃度的0. 1%, 以后逐漸減少, 在28 天為0 。符合標(biāo)準(zhǔn)為防腐劑有效( 通過(guò)測(cè)試) , 不符合為防腐劑無(wú)效(不通過(guò)測(cè)試)。
2.重復(fù)3 次加菌的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)
此方法參照國(guó)際CT FA（國(guó)際化妝品、香精和洗滌劑協(xié)會(huì)）推薦的微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。稱取受試樣品30g , 每隔2 周加菌一次( 即實(shí)驗(yàn)的第1、3 和5 周) , 每次加細(xì)菌量為1 ×106 ～1 ×107個(gè)/ g 樣品和霉菌1×105個(gè)/ g～1×106 個(gè)/ g 樣品。在加菌后的0 天、7 天和14 天( 后一次加菌前) 采樣分析樣品中含菌量, 方法同前。此方法可將受檢樣品分為三類:
( 1)防腐效果優(yōu)良( W) , 即三次加菌后, 在每次加菌后的第7 天或14 天時(shí), 存活菌量減少至不高于起始濃度的0. 01% ( 即≤100 個(gè)/ g或ml） 樣品, 通過(guò)測(cè)試) 。
( 2)防腐效果尚可( M ) , 即三次加菌后, 在每次加菌后的第7 天或14 天時(shí), 存活菌量減少至不高于起始濃度的0. 1%, ( 即≤1000 個(gè)/ g 或mL 樣品, 通過(guò)測(cè)試) 。
( 3)防腐效果差( P) , 即三次加菌后, 在每次加菌后的第7天或14 天時(shí), 存活菌量>mL樣品(不通過(guò)測(cè)試) 。
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